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磷酸钙的聚集有两条途径,一是磷酸钙被小管细胞内吞的途径。
通过显微镜观察患者的组织切片,可以在亨氏袢细胞的基底膜中发现磷酸钙。磷酸钙结晶物曾多次被证实存在于小管管腔内,磷酸钙球粒通过细胞内吞或者穿过细胞间隙被转运到了基底膜或是间质组织。大的结晶或结晶团可以被小管上皮细胞所覆盖。因此,通过不断内吞,磷酸钙结晶可以通过小管细胞在小管外过度聚集,工业级磷酸钙多少钱,直到突破上皮,形成斑块,成为其他结晶的附着点。然而小管细胞内吞途径似乎有另一项重要的作用,就是防止管内结晶堵塞小管。小管细胞以及间质中的巨噬细胞内的溶酶体可以溶解这些磷酸钙和草酸钙。正常人的小管上皮下组织中并不存在磷灰石沉积。如果间质组织中着足够高水平的磷酸钙浓度,那么钙离子和磷酸根离子被排泄到周围间质组织中后又可重结晶。
提高磷酸钙转染法效率的共通步骤,目的都是为了避免产生会被细胞内吞、加工失效的大颗粒沉淀。
提高转染效率的操作有以下这些:
1、将小分子DNA整合在高分子质量基因组DNA上,保亭工业级磷酸钙,以大分子作为运载体,能提高转染效率。
2、测试缓冲液适合的ph,可制备几批pH范围为6.90~7.15的HEPES盐缓冲液,分别测试缓冲效率,找到适pH值。
3、使用转染促进剂,如甘油、氯喹、其他可购买的转染促进剂。因为这些试剂对细胞有一定毒性,因此,应针对每种细胞系通过实验确定转染促进剂处理的佳时机、时长和强度。
除了这些共通的步骤,工业级磷酸钙厂家,不同厂家还会对混匀DNA和磷酸钙的速度有要求。有些方法要求只能轻轻搅动,有些建议用移液器温和吹吸混匀,有些则提倡应缓慢混合。
因此,在使用磷酸钙转染时,应针对不同试剂和细胞系,耐心调整实验参数,才是获得高转染效率的关键。
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