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考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么

在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致da吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色，该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。

考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，da光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有da光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。

该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，洗手液亮蓝批发，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，大庆洗手液亮蓝，xaio可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，洗手液亮蓝价格，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。

英文别名 Bis[4-(N-ethyl-N-3-sulfophenylmethyl)aminophenyl]-2-sulfophenylmethylium disodium salt; C.I. Food Blue 2; Acid Blue 9; Alphazurine FG; C.I. 42090中文别名 [[[4-[N-N-（3′-磺基苯）-氨基、、-（2′-磺基）-亚]-2，5-亚环己二烯基]-（3′-磺基苯）-胺二钠盐、C.I.食品蓝2(42090)、食用亮蓝、双[4-(N--N-3-磺酸苯)氨基]-2-磺酸基二钠盐、食用色素亮蓝；罂红二钠盐;亮蓝1、酸性蓝 9 [CI 42090]、蓝 1 [CI 42090];食品蓝1/羊毛罂红A;食用青色1号(日本名)、食用色素蓝1号;-间磺基苄基-{4'-[4''-(间磺基苄基-)-邻磺基亚]-2'，5-亚}-氢氧化铵内盐之二钠盐、食用色素蓝1号、-间磺基苄基-{4'-[4''-(间磺基苄基--邻磺基亚}-2'5-亚}-氢氧化铵内盐之二钠盐;食品蓝1/羊毛罂红A /亮蓝。CAS NO.3844-45-9EINECS 223-339-8

亮蓝易溶于水，呈绿光蓝色溶液，溶于乙醇、甘油、丙二醇。耐光、耐热性强。对柠檬酸、酒石酸、碱均稳定。

1.用途：一种偶氮型酸性染料。主要用于食品、饮料着色，也用于羊毛、蚕丝的染色及制造色淀。水溶性合成色素，鲜艳的嫩黄色，广泛用于冰淇淋、雪糕、果冻、酸奶、饮料、罐头、糖果包衣等的着色。

根据中国《食品添加剂使用卫生标准》（GB2760-1996）规定：用于高糖果汁（味）或果汁（味）或果汁（味）饮料、碳酸饮料、配制酒、糖果、糕点上彩装、西瓜酱罐头、青梅、虾（味）片、渍制小菜、红绿丝，使用量0.1g/kg；用于冰淇淋，使用量0.02g/kg。用于植物蛋白饮料、乳酸菌饮料，用量0.05g/kg。

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